當細胞(bao)破碎的時候，蛋(dan)白水解酶(mei)就會被釋放出(chu)來或被激活，使電泳結(jie)果(guo)復雜化，影(ying)響最終結(jie)果(guo)分析。為了避(bi)免這些情況的出(chu)現，建議(yi)在(zai)樣(yang)品制備時盡可能在(zai)低溫下進(jin)行。此外(wai)，許(xu)多蛋(dan)白酶(mei)在(zai)PH9以(yi)上就失活(huo)了，因此Tris堿，碳酸鈉(na)或堿性(xing)載體(ti)兩性(xing)電解質往往能抑制(zhi)蛋白(bai)(bai)水解。但是有(you)些(xie)蛋白(bai)(bai)酶(mei)在上述(shu)條件(jian)下仍(reng)然保(bao)持著活(huo)性(xing)，此時應當使用(yong)蛋白(bai)(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑。因此對于(yu)我們想(xiang)要(yao)研究的(de)蛋白(bai)(bai)來說，選擇性(xing)和(he)有(you)效的(de)抑制(zhi)這些(xie)蛋白(bai)(bai)酶(mei)對于(yu)蛋白(bai)(bai)純化路線(xian)設計來說顯得尤(you)為(wei)重要(yao)。

  蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑與蛋白(bai)酶(mei)一樣，都是(shi)紛繁復(fu)雜的，通常(chang)使(shi)用許多化學物(wu)質作為蛋白(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑，如PMSF 和leupeptin。而且由于一種蛋白酶抑制劑只對某一類蛋白酶起作用，因此通常建議復合使用蛋白酶抑制劑，如廣譜蛋白酶抑制劑“雞尾酒"，見下表（來自《蛋白質電泳實驗技術》）。

  但是這樣配置溶液進行處理，有(you)時(shi)也(ye)是頗(po)為麻煩，而且效果(guo)可(ke)能并(bing)不好，目前有(you)一些廠(chang)家試(shi)劑在簡(jian)便操作，和抑制效果(guo)方面有(you)不俗的表現(xian)，可(ke)以(yi)考慮在實驗(yan)中選用，節約時(shi)間和便于結(jie)果(guo)分析。

  比如(ru)，G-Biosciences的ProteaseArrest™蛋白酶抑制劑也許就(jiu)能滿足(zu)這(zhe)種需要(yao)，ProteaseArrest™是一種常規的(de)蛋(dan)白酶抑制劑混合物，提(ti)供100X濃縮的(de)即用溶液。這種(zhong)100X濃度(du)的(de)溶(rong)液適(shi)用于小量，分析樣(yang)本(ben)的(de)應用。在(zai)1ml樣(yang)本中加入10微升的ProteaseArrest可(ke)以(yi)達(da)到(dao)大于95%的抑制效率。對于樣本中(zhong)含量高的蛋白(bai)酶的情(qing)況，可以適當增加(jia)ProteaseArrest的(de)量來達到更大的(de)抑制效率(lv)。

  抑(yi)制(zhi)劑混(hun)合物(wu)包括針對(dui)絲氨(an)酸、半胱氨(an)酸、鈣(gai)蛋(dan)白酶(mei)和金屬蛋(dan)白酶(mei)可(ke)實現可(ke)逆(ni)和不(bu)可(ke)逆(ni)的(de)抑制。可(ke)選擇的(de)EDTA的溶液可實現增(zeng)強的金屬(shu)蛋白酶的抑制。EDTA并(bing)不存(cun)在于ProteaseArrest混合物溶液中，它將抑制那(nei)些需要二價陽(yang)離(li)子（Ca2+, Mg2+ 或Mn2+）來起作(zuo)用的(de)蛋白質(zhi)的(de)活(huo)性(xing)。除此之外，EDTA會抑制那(nei)些通過使用固定金屬(shu)親和層析色譜純化得到的蛋白，也包(bao)括6XHis標(biao)簽重組蛋白。

  由(you)于各種抑制劑(ji)組分的*化(hua)的濃度，ProteaseArrest表(biao)現出(chu)優異的蛋(dan)白酶活性的抑制，因而它適(shi)合在從動物組織，酵母，植物和(he)細菌中進行蛋(dan)白純(chun)化和(he)樣本制備過程中來(lai)保(bao)護蛋(dan)白。

  ProteaseArrest也有獨立包裝(zhuang)的小包裝(zhuang)，能夠在(zai)10ml的溶液中達到大于95%的抑制效率。這種OneQuant™小包(bao)裝主(zhu)要是為了科研人(ren)員方(fang)便(bian)使(shi)用。

  實重(zhong)要的是ProteaseArrest也(ye)可(ke)以(yi)根(gen)據實驗的情況來優化(hua)蛋白酶(mei)抑制劑的濃(nong)度，比如組織中含有高于常規量的蛋白酶(mei)的時(shi)候，可(ke)以(yi)加入2X或者更高(gao)濃度的ProteaseArrest的量(liang)。

在研(yan)究中(zhong)，發現1X濃度(du)的ProteaseArrest的蛋白酶(mei)抑(yi)制效率達到(dao)了95%（0.5mg/ml的小鼠的胰腺提取(qu)物為例）。

  除了(le)蛋白(bai)酶(mei)抑制劑以外，在許多(duo)研(yan)究(jiu)過(guo)程中，尤(you)其是(shi)一些制藥(yao)公司和(he)研(yan)究(jiu)院(yuan)在研(yan)究(jiu)藥(yao)理(li)學機制的(de)(de)時候，需要了(le)解蛋白(bai)磷(lin)酸化途徑，因此(ci)一個(ge)重要的(de)(de)步驟就(jiu)是(shi)準確的(de)(de)觀(guan)察一般和(he)特異的(de)(de)磷(lin)酸化狀態，所以蛋白抽提的(de)另一個(ge)重要保(bao)(bao)護過程就是(shi)對磷酸化狀態的(de)有效保(bao)(bao)護。

  磷酸化的蛋(dan)白可以被非特異(yi)(yi)性(xing)的磷酸酶(mei)（例如：堿性(xing)磷酸酶(mei)），特異(yi)(yi)性(xing)的絲氨(an)酸/蘇氨酸(suan)(suan)磷酸(suan)(suan)酶、酪氨酸(suan)(suan)蛋白磷酸(suan)(suan)酶或雙重特異(yi)性磷酸(suan)(suan)酶去磷酸(suan)(suan)化。針對這(zhe)種(zhong)情(qing)況G-Biosciences也推出了一種PhosphataseArrest™磷酸酶(mei)抑(yi)制劑混(hun)合(he)物(wu)，它能夠保持(chi)細胞和組織中蛋白(bai)的磷(lin)酸化狀(zhuang)態。PhosphataseArrest™包括3種抑(yi)制劑產品。

phosphataseArrest™ I

一種廣泛的磷酸(suan)酶抑制(zhi)劑混(hun)合(he)物包括5種(zhong)磷酸酶(mei)抑制劑，能夠(gou)特異性的抑制絲氨酸/蘇(su)氨(an)酸，和酪氨(an)酸雙(shuang)重特異性的磷酸酶(mei)。PhosphataseArrest™ I是一種(zhong)穩(wen)定的溶液組成，含有氟(fu)化鈉(na)，正釩酸鈉(na)，焦磷酸鈉(na)，β-磷酸(suan)甘油，鉬酸(suan)鹽等。

PhosphataseArrest™ II

一種廣泛的磷酸酶抑制劑混(hun)合物包括5種磷酸(suan)酶(mei)的抑(yi)制劑能夠抑(yi)制酸(suan)性，堿性和酪氨酸(suan)磷酸(suan)酶(mei)。PhosphataseArrest™ II含有優化濃度的氟化鈉，酒石酸鈉，正釩酸鈉，咪唑和鉬酸鹽。

PhosphataseArrest™ III

一種廣泛(fan)的磷酸(suan)酶抑制(zhi)劑混合物包括3種磷酸酶的抑(yi)制劑能夠抑(yi)制堿性和絲氨(an)酸/蘇氨酸磷酸酶。PhosphataseArrest™ III是一(yi)種穩定的，方便(bian)的溶液，由斑蝥素，對溴(xiu)四咪唑草酸(suan)鹽和(he)腫瘤(liu)促進劑組成。

總而言之，在實驗中適當的(de)(de)選擇一些(xie)經過嚴格的(de)(de)質量監控的(de)(de)產(chan)品，想來相比(bi)較(jiao)于(yu)家制的(de)(de)雞(ji)尾酒而言具有(you)更好的(de)(de)使用(yong)重復(fu)性，和有(you)效性，讓(rang)我們在下游(you)應用(yong)中得到(dao)更潔凈和清(qing)晰的(de)(de)結果。

華雅思創生(sheng)物—G-Biosciences全國授(shou)權代理

華(hua)雅(ya)思(si)創生(sheng)(sheng)物是為生(sheng)(sheng)命科學(xue)領域內(nei)的科學(xue)研(yan)究(jiu)、細(xi)胞治療(liao)和(he)生(sheng)(sheng)物制藥相(xiang)關(guan)人員提供優質產品和(he)服務的生(sheng)(sheng)物高(gao)科技集團，主辦(ban)的干細(xi)胞搜(sou)網(ys-bio,cn)為中國干細胞領域較大資源庫，網站提供：蛋白質組學研究試劑、干細胞治療產品、細胞培養試劑耗材、臍帶MSC間充質干細胞培養基、IPS細胞ES胚胎干細胞培養基、DC細胞淋巴細胞無血清培養基、R&D細胞因子等種類豐富的產品。以“Yes Service"核心服務理念，緊緊圍繞“Yes Service focus on Biology  專注生物"打造中華民族全新服務體系，我們與客戶攜手一起探索生命科學奧秘，解決人類健康問題，發展綠色環保生態，推動世界和諧持續發展。