轉染試劑的使用方法

更(geng)新(xin)時(shi)間：2022-11-24

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　　轉染試劑是一種新結構類型的DNA轉染試劑。該轉染試劑為陽離子聚合物和脂質體的雜合體，具有轉染效率高、重復性好、毒性低和穩定性的特點，目前該轉染試劑為我公司產品。轉染試劑用于哺乳動物細胞的轉染，如腫瘤細胞系(常見的細胞有HEK293,CHO,COS-1,COS-7,Hela,NIH3T3等)和原代培養的細胞以及昆蟲細胞sf9,sf21等。轉染試劑，1.0ml，可用于24孔板轉染333次或者6孔板166次轉染操作。

　　轉染試劑的使用方法：

　　1、接種細胞：

　　對于貼壁細胞，轉染前18-24 h進行鋪板（不含抗生素），使其在轉染時的密度大約在80%左右。對于懸浮細胞，轉染當天，配制EZ Trans-DNA復合物之前進行鋪板，每500 ?L生長培養基中加入4~8×105cells。

　　2、準備EZ Trans-DNA復合物：

　　a、對于每孔細胞，將1 μg質粒DNA稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養基（或者OPTI-MEMⅠ培養基），混勻。

　　b、對于每孔細胞，將3 μL EZ Trans轉染試劑稀釋到40 μL無血清的高糖DMEM培養基（或者OPTI-MEMⅠ培養基），輕輕混勻。

　　注：無血清的高糖DMEM培養基是稀釋液，不能使用含血清的培養基進行DNA和EZ Trans轉染試劑的稀釋。因為EZ Trans-DNA轉染復合物的形成過程不能含有血清。

　　c、將稀釋好的EZ Trans轉染試劑盡快全部加入到已稀釋好的質粒DNA中，輕輕混勻。

　　d、室溫放置10-15 min，以形成EZ Trans-DNA復合物。

　　3、轉染細胞：

　　a、將上述80 μL EZ Trans-DNA轉染復合物均勻滴入到含細胞的培養皿中。輕輕晃動培養皿或輕微振蕩，讓EZ Trans-DNA復合物分散均勻。

　　b、在37℃，5% CO2培養箱培養6-18 h，去除含EZ Trans-DNA復合物的培養液，更換新的培養液，繼續培養至對轉入基因表達分析。