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流式細胞儀的調試和校準方法

更新時間(jian)：2023-02-22

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 　　流(liu)式(shi)細(xi)(xi)(xi)胞儀是(shi)一種用于分(fen)析(xi)細(xi)(xi)(xi)胞的技(ji)術，包括細(xi)(xi)(xi)胞計數、表(biao)型、細(xi)(xi)(xi)胞周(zhou)期評估和生(sheng)存(cun)能(neng)力。流(liu)式(shi)細(xi)(xi)(xi)胞儀中(zhong)激(ji)光器產生(sheng)的光被樣品中(zhong)的細(xi)(xi)(xi)胞散(san)射，由檢測(ce)器測(ce)量，然(ran)后轉(zhuan)化為可分(fen)析(xi)和測(ce)量的信號。
　　調(diao)試和(he)校準
　　流式細胞儀在使用(yong)前，甚至在使用(yong)過程中都要精心進(jin)行調試(shi)，以(yi)保證工作的(de)可靠性和(he)最佳(jia)性。調試(shi)的(de)項目主要是激光強(qiang)度、液流速度和(he)測量區的(de)光路等。
　　激光(guang)(guang)強度：除調整(zheng)反射鏡的(de)(de)角度以調整(zheng)到所需波長的(de)(de)激光(guang)(guang)出光(guang)(guang)外，還要結合(he)顯示(shi)屏(ping)上(shang)的(de)(de)光(guang)(guang)譜曲線使激光(guang)(guang)的(de)(de)強度輸出為最大(da)。
　　液流速度：可通過操作臺數字(zi)顯(xian)示監督(du)，調節　氣(qi)體(ti)壓力大小(xiao)以(yi)獲得穩定的液流速度。
　　測量(liang)區光路調(diao)節(jie)　：這是(shi)調(diao)試(shi)工作的關鍵。需要保證在(zai)測量(liang)區的液流、激光束、90散(san)射測量(liang)光電系統垂直正交，而且(qie)交點較(jiao)小。一(yi)般可在(zai)用標準熒光微(wei)球(qiu)等校準中完成。
　　流式(shi)細(xi)胞(bao)(bao)術中所(suo)測得的(de)(de)(de)量(liang)是相對值，因此需(xu)要在使用(yong)(yong)(yong)前(qian)或使用(yong)(yong)(yong)中對系統進行(xing)校(xiao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)或標(biao)定，這樣(yang)才能(neng)通過相對測量(liang)獲(huo)得絕(jue)對的(de)(de)(de)意(yi)義。因而FCM中的(de)(de)(de)校(xiao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)具有(you)雙重功能(neng)：儀器的(de)(de)(de)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)直調整和定量(liang)標(biao)度。標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)樣(yang)品應該穩定，有(you)形成份形狀應是大小比較(jiao)一(yi)致球形，樣(yang)品分散性能(neng)良(liang)好，且經濟、容易獲(huo)得。常(chang)用(yong)(yong)(yong)標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)熒(ying)光(guang)(guang)微球作(zuo)為(wei)(wei)非生物學標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)樣(yang)品，雞(ji)(ji)血(xue)(xue)(xue)紅(hong)(hong)(hong)細(xi)胞(bao)(bao)做為(wei)(wei)生物學標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)樣(yang)品。微球用(yong)(yong)(yong)樹脂(zhi)材(cai)料制(zhi)作(zuo)，或標(biao)有(you)熒(ying)光(guang)(guang)素，或不標(biao)記熒(ying)光(guang)(guang)素。所(suo)用(yong)(yong)(yong)的(de)(de)(de)雞(ji)(ji)血(xue)(xue)(xue)紅(hong)(hong)(hong)細(xi)胞(bao)(bao)標(biao)準(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)(zhun)樣(yang)品制(zhi)作(zuo)過程昭(zhao)下(xia)：取(qu)3.8%枸櫞酸或肝素抗(kang)(kang)凝的(de)(de)(de)雞(ji)(ji)血(xue)(xue)(xue)（抗(kang)(kang)凝劑：雞(ji)(ji)血(xue)(xue)(xue)=1：4），經PBS清(qing)洗(xi)3次(ci)，再用(yong)(yong)(yong)5～10ml的(de)(de)(de)1.0%戊二醛(quan)與(yu)清(qing)洗(xi)后的(de)(de)(de)雞(ji)(ji)紅(hong)(hong)(hong)細(xi)胞(bao)(bao)混合，室溫下(xia)振蕩醛(quan)化(hua)24h，最(zui)后經PBS再清(qing)洗(xi)，貯4℃冰(bing)箱中備用(yong)(yong)(yong)。需(xu)要指(zhi)出的(de)(de)(de)是因為(wei)(wei)未(wei)經熒(ying)光(guang)(guang)染色，所(suo)測光(guang)(guang)信號為(wei)(wei)雞(ji)(ji)血(xue)(xue)(xue)紅(hong)(hong)(hong)蛋白的(de)(de)(de)自發熒(ying)光(guang)(guang)。