用(yong)層(ceng)析(xi)法(fa)，電(dian)泳法(fa)，免疫化學的(de)(de)(de)方(fang)法(fa)對蛋白樣本(ben)進行分離或(huo)分析(xi)前通常(chang)(chang)需(xu)要先進行蛋白定量。用(yong)比(bi)色法(fa)進行蛋白定量分析(xi)的(de)(de)(de)試劑通常(chang)(chang)分為(wei)兩類：一類是間接(jie)檢(jian)(jian)測(ce)法(fa)，即檢(jian)(jian)測(ce)與蛋白螯合(he)后被還原銅離子；另一類是直(zhi)接(jie)檢(jian)(jian)測(ce)法(fa)，即使(shi)用(yong)與蛋白結(jie)合(he)的(de)(de)(de)染料，檢(jian)(jian)測(ce)樣品中顏(yan)色的(de)(de)(de)變(bian)化。所有的(de)(de)(de)檢(jian)(jian)測(ce)方(fang)法(fa)都(dou)要適(shi)用(yong)于(yu)應(ying)用(yong)的(de)(de)(de)適(shi)用(yong)性(xing)。每種檢(jian)(jian)測(ce)方(fang)法(fa)都(dou)有它的(de)(de)(de)局限和優勢，出于(yu)復雜的(de)(de)(de)研(yan)發需(xu)要，以G-Biosciences公(gong)(gong)司為代表的(de)(de)生物科技公(gong)(gong)司開發出(chu)了(le)多種蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)定量(liang)(liang)(liang)試(shi)(shi)劑盒。這些試(shi)(shi)劑都是熟悉的(de)(de)、穩定的(de)(de)方法(fa)，并且能夠提供(gong)一致可(ke)靠的(de)(de)結(jie)果，包括(kuo)增強(qiang)的(de)(de)染料(liao)結(jie)合蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)定量(liang)(liang)(liang)，基于銅離子(zi)的(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)定量(liang)(liang)(liang)，創新的(de)(de)測(ce)試(shi)(shi)條和(he)(he)點蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)定量(liang)(liang)(liang)。總(zong)體而言，這些方法(fa)代表了(le)目前(qian)的(de)(de)比色法(fa)檢測(ce)和(he)(he)總(zong)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)定量(liang)(liang)(liang)的(de)(de)技術(shu)水平。

四(si)大金(jin)剛之-BCA蛋白定量

BCA蛋(dan)白定量(liang)法是(shi)一種快速靈敏、穩定可靠的蛋(dan)白定量(liang)測定方法, 也叫(jiao)史密斯分析(xi)定量，和去污劑溶解(jie)的蛋白溶液都是兼容的。

BCA蛋(dan)白定(ding)量(liang)法基(ji)于(yu)2個(ge)反(fan)應。首(shou)先，蛋白(bai)樣品中的(de)肽鍵還(huan)原(yuan)二價銅(tong)離(li)子(zi)為(wei)一價銅(tong)離(li)子(zi)，這是(shi)一個(ge)溫(wen)度依賴的(de)反(fan)應。被還(huan)原(yuan)銅(tong)離(li)子(zi)的(de)量(liang)和溶液中的(de)蛋白(bai)的(de)量(liang)成正比。下一步，Cu+與BCA試劑形成紫顏色的(de)絡合(he)物，測(ce)定其在562nm處的吸收值，在(zai)0.02-2mg/ml濃度范圍內有較(jiao)好的線性關系，并(bing)與(yu)標準曲線對比，即(ji)可計算待(dai)測蛋白的濃度。 

BCA蛋白(bai)定量分(fen)析適合(he)在 1ml比色皿(min)或(huo)微(wei)孔板的(de)蛋(dan)白溶液定(ding)量。試劑盒可以(yi)提供傳統的(de)BSA蛋白標(biao)準(zhun)物或(huo)非動物蛋白標(biao)準(zhun)物。對于(yu)稀釋的(de)低濃度(du)的(de)蛋白樣(yang)品(pin)（0.5-20µg/ml），筆者推薦使用微(wei)量(liang)BCA蛋白定量(liang)分(fen)析(xi)試劑盒(he)。對于含有還原劑的樣(yang)品，推薦(jian)你使(shi)用(yong)BCA-還原劑兼容型蛋白定(ding)量分析試劑盒。

BCA的優勢(shi)是：

l 靈敏度高的(de)顯色檢測

l 蛋白濃度(du)檢測范圍20-2,000µg/ml

l 與多數離子(zi)(zi)和非離子(zi)(zi)型去污劑(ji)兼容(rong)

l 方便(bian)的微孔板和1ml比色皿(min)檢(jian)測形式(shi)

四大金(jin)剛之(zhi)-CB-X蛋(dan)白定(ding)量

對于科研人員來說，從市場上大(da)量的(de)蛋白定量產(chan)品中選擇(ze)可以和自己的(de)樣(yang)本兼容(rong)的(de)試劑盒是一個難題(ti)。CB-X蛋白定量分析試劑盒解決(jue)了這個難(nan)題，因為它和常規使用(yong)的(de)緩沖(chong)液以及蛋白分離，儲存盒檢(jian)測(ce)的(de)條件(jian)都(dou)是兼容的(de)。

對于簡單不(bu)復雜的水質緩沖液蛋白樣本，CB-X是一個高度靈敏的，單個試劑的檢測，5分鐘可(ke)以完成實驗。CB-X蛋白(bai)定(ding)量(liang)分析試劑盒使用一個改進版的考(kao)馬斯亮藍(lan)染料。

對于復雜的(de)蛋(dan)白樣(yang)本，CB-X蛋(dan)白(bai)(bai)定量(liang)分(fen)析試劑(ji)(ji)盒(he)帶(dai)有能(neng)夠去除干擾準確(que)蛋(dan)白(bai)(bai)定量(liang)的(de)試劑(ji)(ji)和(he)化學品從(cong)而(er)來回收(shou)樣(yang)本的(de)必需試劑(ji)(ji)。這(zhe)些干擾試劑(ji)(ji)包括去污劑(ji)(ji)，離液劑(ji)(ji)，還(huan)原劑(ji)(ji)，烷化劑(ji)(ji)，糖，高鹽濃度(du)，緩沖液試劑(ji)(ji)，螯合劑(ji)(ji)。去雜回收(shou)步驟和(he)隨后的(de)蛋(dan)白(bai)(bai)定量(liang)分(fen)析實在同一個管中完成(cheng)保證沒有蛋(dan)白(bai)(bai)的(de)丟失和(he)蛋(dan)白(bai)(bai)定量(liang)的(de)準確(que)性(xing)。

如果(guo)這(zhe)個(ge)蛋(dan)白(bai)樣本(ben)不(bu)包含干(gan)擾試(shi)(shi)劑(ji)可(ke)以(yi)直接進行(xing)單個(ge)試(shi)(shi)劑(ji)定量(liang)分析同時可(ke)以(yi)得到一個(ge)線(xian)性反應。如果(guo)干(gan)擾試(shi)(shi)劑(ji)存(cun)在(zai)或者產生(sheng)人為的結果(guo)這(zhe)時蛋(dan)白(bai)樣本(ben)可(ke)用去雜(za)回收試(shi)(shi)劑(ji)進行(xing)一步處理，然后進行(xing)蛋(dan)白(bai)定量(liang)來產生(sheng)線(xian)性的反應。

CB-X蛋白(bai)定(ding)量分析試(shi)劑盒同時提供一個(ge)批(pi)次特定(ding)性的CB-X查詢(xun)表格，這可以讓(rang)科(ke)研人(ren)員進行單個蛋白(bai)的回收(shou)，然后定量，之后在CB-X查(cha)詢(xun)表格上通過吸(xi)收值來(lai)得到蛋白的濃度。CB-X查詢表(biao)格消除(chu)了所需要的蛋白標準，節省的大量的時間和精力。CB-X查詢表(biao)格是通過復雜的蛋白混合物(wu)(wu)制成，和來自于哺乳動物(wu)(wu)，植物(wu)(wu)，細菌和酵母的蛋白數據(ju)可(ke)以很好的吻合。一套牛血(xue)清(qing)白蛋白標準物(wu)(wu)一起提供，當科(ke)研(yan)人(ren)員單(dan)獨使用(yong)CB-X染料(liao)，或者(zhe)他們傾向于得到(dao)自己的(de)(de)標(biao)準(zhun)曲線(xian)或得到(dao)在自己特定的(de)(de)試驗下(xia)的(de)(de)CB-X查詢表格時，這套標準(zhun)物用于(yu)產生標準(zhun)曲線。CB-X蛋(dan)白(bai)定量(liang)分(fen)析試劑盒在每個檢測0.5-50微克的(de)時(shi)候是非(fei)常可靠的(de)。試劑盒包含足夠的(de)CB-X檢測(ce)染料來進行500次蛋白定量(liang)以及足夠的回(hui)收試劑(ji)用于(yu)250次(ci)回收。

CB-X檢測的優勢：

l 0.5-50微克的線(xian)性反應

l 迅速沉淀(dian)和顏(yan)色反應

l 效期長(chang)，可(ke)以有(you)12個月穩定(ding)保存

l 高度的可靠性(xing)和重復性(xing)

四(si)大金剛之-RED 660蛋白定量

去污劑(ji)和(he)還原劑(ji)兼容(rong)的蛋(dan)白定量(liang)

RED 660蛋白定量檢(jian)測(ce)是(shi)基于一種試劑(ji)的(de)顯色反應，它的(de)效果要優于其他商業化(hua)的(de)顯色反應定量檢(jian)測(ce)，包(bao)括(kuo)Bradford和(he)增(zeng)強的Coomassie/ Bradford定量檢(jian)測。RED 660蛋白(bai)定(ding)量檢測為您(nin)帶來更好的(de)(de)線(xian)性(xing)(xing)，更好的(de)(de)顏(yan)色(se)穩定(ding)性(xing)(xing)，以及和考馬斯法相比對于(yu)去污(wu)劑(ji)，還原劑(ji)和其他干擾(rao)試(shi)劑(ji)更好的(de)(de)兼容性(xing)(xing)。這種單個的(de)(de)即用(yong)的(de)(de)試(shi)劑(ji)可以為您(nin)迅速(su)分(fen)析總蛋白(bai)濃度(du)和產生高度(du)可重復(fu)性(xing)(xing)的(de)(de)結果。

這種(zhong)檢(jian)測適用(yong)于簡單和快速的蛋(dan)(dan)白定量，可以檢(jian)測蛋(dan)(dan)白濃度在50-2000μg/ml的濃度范圍內。

這種檢測是(shi)基(ji)于(yu)單個染料金屬復合物試劑。蛋白和染料金屬復合物的結合是在酸性的條件下從而產生顏色的變化，從紅棕色變為綠色，顏色密度的變化和蛋白濃度呈正比，顏色的變化是染料金屬復合物在低PH值下(xia)去質(zhi)子化(hua)的(de)(de)結(jie)果(guo)，這個過程通過和正電荷的(de)(de)氨(an)基酸基團反應下(xia)完成(cheng)的(de)(de)。蛋白定(ding)量可以(yi)使用少至0.5微(wei)克的蛋白(bai)，蛋白(bai)染料復合物可以在5分鐘內(nei)達到反應終點，同時可以在幾(ji)天內(nei)保持穩定。

RED 660蛋白定量(liang)試劑盒(he)提供500個標準檢測(ce)或者2500個標準(zhun)微孔檢(jian)測。RED 660蛋白(bai)定量試劑(ji)盒和大部分(fen)去污劑(ji)兼容，它的兼容性可以被(bei)Neutralizer™進一(yi)步增強。Neutralizer™是(shi)一種(zhong)*的化學物質，它能(neng)夠隔絕離子去污劑，包括SDS，使溶液和RED 660蛋(dan)白定量試劑(ji)兼容。Neutralizer™也可以和(he)Laemmli上樣緩沖液(ye)一(yi)起使用。

對于蛋(dan)白(bai)定量的干擾

兼(jian)容于RED 660蛋白定量的試(shi)(shi)劑(ji)以及(ji)這些試(shi)(shi)劑(ji)在標準(zhun)檢測種(zhong)所(suo)(suo)接(jie)受的濃度被列了出來。在大部分情況下使(shi)用(yong)一(yi)個校(xiao)準(zhun)的空白對照可以消除(chu)或減少(shao)由干(gan)擾(rao)試(shi)(shi)劑(ji)所(suo)(suo)導致(zhi)的錯誤(wu)。

*表(biao)明這種試劑和(he)RED 660蛋白定量一(yi)起使用所接受的濃度是配套(tao)Neutralizer™一(yi)起使用。

RED 660蛋白定量(liang)優勢(shi)：

l 迅速，單個試(shi)劑檢測

l 兼(jian)容(rong)性(xing)好，和一(yi)系列去污(wu)劑(ji)和還原(yuan)劑(ji)兼(jian)容(rong)

l 線(xian)性好(hao)，和其他蛋白定量(liang)方法相(xiang)比有(you)更好(hao)的線性標準曲線

四大(da)金(jin)剛之-Non-Interfering™（NI）無干擾蛋白定量

保證蛋白定量不受干擾試劑的影響。

一種(zhong)高度靈敏的(de)(de)，顯色法(fa)的(de)(de)蛋白(bai)定量方法(fa)，這種(zhong)檢(jian)測克服了常規實驗室試劑存在于蛋白(bai)溶液中對蛋白(bai)定量的(de)(de)干擾，同時顯示出最小的(de)(de)蛋白(bai)和蛋白(bai)之間(jian)的(de)(de)檢(jian)測波(bo)動性。

這種定量(liang)方法不受常規實驗(yan)試劑(ji)(ji)存在的影響，比如還原劑(ji)(ji)，螯合(he)試劑(ji)(ji)，去污劑(ji)(ji)，氨(an)試劑(ji)(ji)，糖(tang)，離液(ye)劑(ji)(ji)，鹽(yan)類，藥物，抗(kang)體(ti)，鈷(gu)和其他(ta)常規實驗(yan)室試劑(ji)(ji)。NI蛋(dan)白(bai)定(ding)量法由兩步組成(cheng)。

通(tong)用蛋(dan)白沉淀(dian)試劑(UPPA™)加到(dao)蛋白(bai)溶液中(zhong)來迅(xun)速沉淀總(zong)蛋白(bai)。蛋白(bai)通過離心得到(dao)固(gu)定(ding)以(yi)及干擾試劑在上(shang)清液中(zhong)從而(er)被丟(diu)棄(qi)。

蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)濃度得到(dao)定量通過和(he)堿性銅(tong)離子(zi)溶液進(jin)行混(hun)合(he)，銅(tong)離子(zi)結合(he)到(dao)肽的(de)(de)主(zhu)鏈上(shang)，定量檢(jian)測(ce)未結合(he)的(de)(de)銅(tong)離子(zi)。檢(jian)測(ce)和(he)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)的(de)(de)側鏈無(wu)關從(cong)而使(shi)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)之(zhi)間的(de)(de)波動性可以最小(xiao)化。顏(yan)色深(shen)度和(he)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)的(de)(de)量成(cheng)反比。

Non-Interfering™（NI）無(wu)干擾(rao)蛋白定(ding)量優勢：

l 線性(xing)反(fan)應0.5μg-50μg蛋(dan)白

l 少(shao)量樣本即可，只需1-50μl

l 不(bu)受非蛋白化學品和(he)試劑的影(ying)響(xiang)

l 實驗時間，大約30分鐘(zhong)

l 產品效期(qi)長，可以存(cun)放一年

常用(yong)的(de)蛋白定(ding)量(liang)產(chan)品的(de)選擇：

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