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RNA降解的常見原因,如何防止RNA降解

更新時(shi)間(jian):2023-11-01

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RNA降解(jie)是一個常見(jian)的(de)問(wen)題,特別(bie)是在(zai)進行RNA提取和下游分析時。以下是導致RNA降解(jie)的(de)一些常見(jian)原(yuan)因及其相應的(de)解(jie)決方案:

  1. 新鮮(xian)細(xi)胞: 裂解(jie)液不(bu)足會導致裂解(jie)不(bu)充(chong)分,從而使部分RNA未被釋放出來(lai)(lai)。為了確保RNA釋放出來(lai)(lai),應(ying)在(zai)裂解(jie)過程中加入足夠(gou)的裂解(jie)液。

  2. 新鮮組(zu)(zu)織: 若(ruo)組(zu)(zu)織中含有內源性核(he)酸酶,則很(hen)難(nan)避免RNA酶的(de)降(jiang)解。建議采用(yong)的(de)方(fang)法(fa)是在液氮條(tiao)件下將(jiang)組(zu)(zu)織研磨,并且,在勻漿(jiang)時(shi)采用(yong)更多的(de)裂解液。

  3. 冷凍(dong)樣品: 如果樣品未(wei)經液(ye)氮(dan)速(su)冷直接轉移(yi)到-70℃冰箱(xiang)存(cun)放(fang),會使RNA緩慢降(jiang)解。為了(le)避免這種情況,應(ying)在樣品取材后迅速(su)置于(yu)液(ye)氮(dan)中冷凍(dong)存(cun)放(fang),然后轉移(yi)到-70℃冰箱(xiang)存(cun)放(fang)。

  4. 外源RNA酶的(de)污(wu)染(ran): 實驗試劑、器械等(deng)實驗用(yong)(yong)品應(ying)采用(yong)(yong)DEPC水滅菌(jun)處理,以消除外源RNA酶的(de)污(wu)染(ran)。

  5. 內(nei)(nei)源(yuan)RNA酶的(de)污染(ran)(ran): 抑制(zhi)劑失效或者(zhe)用量不夠,以及實(shi)驗樣品(pin)過(guo)多或勻漿溫度(du)(du)過(guo)高都可(ke)能導(dao)致內(nei)(nei)源(yuan)RNA酶的(de)污染(ran)(ran)。為了減少內(nei)(nei)源(yuan)RNA酶的(de)影響,可(ke)適當增加抑制(zhi)劑的(de)濃度(du)(du),確保樣品(pin)處(chu)理時(shi)處(chu)于適宜的(de)溫度(du)(du)。

  6. 長時間暴(bao)露于高(gao)(gao)溫(wen)(wen)(wen)或光照環(huan)境下(xia): RNA容易受(shou)到紫外線和高(gao)(gao)溫(wen)(wen)(wen)的影響而發生降解,因此在實驗過程中應避(bi)免樣品暴(bao)露于高(gao)(gao)溫(wen)(wen)(wen)或光照環(huan)境下(xia)。

  7. 提取(qu)(qu)過(guo)程(cheng)中的反復冷凍解(jie)凍: 這種情況會破壞RNA結構,使(shi)其更容易受到酶的作用而降解(jie)。因此,在RNA提取(qu)(qu)過(guo)程(cheng)中應盡量減少冷凍解(jie)凍次數,最好一次性完成(cheng)整個提取(qu)(qu)過(guo)程(cheng)。


產品名稱:PAXgene全血RNA管(guan) 樣本采集保存
產品貨號:762165
產品規格(ge):2.5mL,100支/盒

PAXgene血(xue)液(ye)RNA管旨在(zai)立即穩(wen)定(ding)細胞(bao)內RNA,從而產生(sheng)準確且可重(zhong)復的(de)基因表達數(shu)據。PAXgene血(xue)液(ye)RNA管含有(you)一種(zhong)專有(you)試(shi)劑,可在(zai)采集后立即穩(wen)定(ding)細胞(bao)內RNA。細胞(bao)內RNA在(zai)室溫(wen)下穩(wen)定(ding)長(chang)(chang)達三天或在(zai)2-8°C下穩(wen)定(ding)長(chang)(chang)達五天。PAXgene試(shi)管可以(yi)在(zai)-20°C至-70°C的(de)溫(wen)度下冷凍,以(yi)便長(chang)(chang)期(qi)儲存。