產品名稱：人 iPS細胞基因編輯和單細胞克隆系統

產品貨號：CellArtis Y30021

產品品牌：TAKARA/ CellArtis

英文名稱：Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit

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從開始到結束：人iPS細胞基因編輯和單細胞克隆系統

人(ren)誘(you)導多能(neng)干細(xi)胞(bao)(bao)(bao)（Human induced pluripotent stem cells，hiPSCs)是(shi)一個(ge)功(gong)能(neng)強大的(de)(de)研究工具和(he)疾病(bing)模型(xing)(xing)(xing)，因(yin)為(wei)其具備增殖(zhi)、自我更新、分化為(wei)多種細(xi)胞(bao)(bao)(bao)類型(xing)(xing)(xing)的(de)(de)能(neng)力。此外，人(ren)iPS細(xi)胞(bao)(bao)(bao)還可以再現細(xi)胞(bao)(bao)(bao)來源個(ge)體的(de)(de)疾病(bing)表型(xing)(xing)(xing)和(he)基(ji)(ji)因(yin)型(xing)(xing)(xing)。將人(ren)iPS細(xi)胞(bao)(bao)(bao)結合(he)基(ji)(ji)于CRISPR/Cas9的(de)(de)基(ji)(ji)因(yin)編輯(ji)(ji)技術，可以在同基(ji)(ji)因(yin)的(de)(de)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)系中(zhong)研究特定基(ji)(ji)因(yin)改變(bian)引起的(de)(de)功(gong)能(neng)影響，因(yin)為(wei)基(ji)(ji)因(yin)編輯(ji)(ji)過的(de)(de)人(ren)iPS細(xi)胞(bao)(bao)(bao)能(neng)提供(gong)可再生的(de)(de)、無遺傳變(bian)異的(de)(de)患病(bing)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)和(he)健康細(xi)胞(bao)(bao)(bao)資源。

CRISPR/Cas9系統已經成(cheng)為一(yi)個(ge)(ge)強大的(de)(de)基(ji)因(yin)編輯(ji)工具(ju)，因(yin)為其高(gao)的(de)(de)靶向特(te)異性，編輯(ji)效率(lv)和易用(yong)性。該技術(shu)的(de)(de)強大主要(yao)源于(yu)它的(de)(de)簡(jian)單，因(yin)為全(quan)部只需要(yao)一(yi)個(ge)(ge)Cas9核酸酶結合一(yi)個(ge)(ge)單鏈向導(dao)RNA（single guide RNA，sgRNA) 就可以(yi)決定靶向特(te)異性（Jinek et al. 2012)。這(zhe)種(zhong)RNA編程的(de)(de)（RNA-programmable）方(fang)法利用(yong)了非同源末端連接(non-homologous end joining，NHEJ) DNA修復途(tu)徑的(de)(de)易錯特(te)性，進而(er)產生基(ji)因(yin)敲除(通(tong)過(guo)插入(ru)/刪除)。這(zhe)種(zhong)方(fang)法也(ye)可以(yi)通(tong)過(guo)同源重組（homology-directed repair，HDR)途(tu)徑被用(yong)于(yu)基(ji)因(yin)敲入(ru)。

CRISPR/Cas9系統的組件可以通過多種方法(fa)成功導入(ru)至靶細胞，包括基于載(zai)體的表達系統，RNA轉染(ran), 導入(ru)Cas9/sgRNA核(he)糖核(he)蛋白（ribonucleoprotein，RNP)復(fu)合物(Sander and Joung 2014)等。與基于載(zai)體的方法(fa)相比，直接導入(ru)Cas9/sgRNA RNPs提供(gong)了一種快速轉入(ru)基因編輯實驗的方法(fa)，同時脫(tuo)靶效應的可能性(xing)更小（Kim et al. 2014)。

一(yi)旦Cas9/sgRNA RNP復合物(wu)被(bei)導入，為(wei)(wei)了分離和(he)(he)篩選(xuan)感興趣的(de)(de)(de)(de)基(ji)因(yin)型(xing)，單(dan)(dan)細(xi)(xi)(xi)胞必須被(bei)分離并擴增(zeng)為(wei)(wei)克(ke)(ke)隆細(xi)(xi)(xi)胞系(xi)。傳(chuan)統上,從(cong)基(ji)因(yin)編(bian)輯的(de)(de)(de)(de)hiPS細(xi)(xi)(xi)胞建(jian)立一(yi)個克(ke)(ke)隆群(qun)是低效的(de)(de)(de)(de)、具有挑戰性的(de)(de)(de)(de)和(he)(he)耗時的(de)(de)(de)(de)，因(yin)為(wei)(wei)hiPS 細(xi)(xi)(xi)胞是以集落生長和(he)(he)傳(chuan)代(dai)的(de)(de)(de)(de)。通(tong)常，這會導致細(xi)(xi)(xi)胞死亡(wang)和(he)(he)提前分化(hua)。然而，Cellartis單(dan)(dan)細(xi)(xi)(xi)胞克(ke)(ke)隆系(xi)統包含一(yi)個成(cheng)分確定的(de)(de)(de)(de)培養系(xi)統(由(you)基(ji)礎培養基(ji)，包被(bei)劑，和(he)(he)添加劑組(zu)成(cheng))，用(yong)于(yu)有效形(xing)成(cheng)單(dan)(dan)細(xi)(xi)(xi)胞克(ke)(ke)隆和(he)(he)擴增(zeng)基(ji)因(yin)編(bian)輯后的(de)(de)(de)(de)hiPSC克(ke)(ke)隆。DEF-CS culture system (Asplund et al. 2016)是一(yi)個基(ji)于(yu)單(dan)(dan)層培養的(de)(de)(de)(de)系(xi)統，規避了集落狀培養帶來的(de)(de)(de)(de)挑戰，允(yun)許(xu)單(dan)(dan)細(xi)(xi)(xi)胞傳(chuan)代(dai)和(he)(he)促進接種的(de)(de)(de)(de)單(dan)(dan)細(xi)(xi)(xi)胞存(cun)活和(he)(he)后續擴增(zeng)。

Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是(shi)一個完整的(de)(de)，在(zai)無飼養層和成分確定條件(jian)下，用于hiPSCs有效擴增和擴大(da)生產的(de)(de)系(xi)統。試劑盒包含了(le)從接種單細(xi)胞至(zhi)96孔(kong)板到(dao)擴增至(zhi)48孔(kong)板過程中所有必要的(de)(de)試劑。單細(xi)胞克(ke)隆擴增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續培養。

產品特點：

1.成分確定的，無血清，無飼養層培養

2.All-In-One型: 培養基(ji)+添加劑+包被劑維持良好的多(duo)能性狀態，背(bei)景分化低

3.細胞非集落狀均(jun)勻生(sheng)長，輕松單細胞傳代

4.單個干(gan)細(xi)胞基因操作(zuo)實驗的理(li)想選擇

產品名稱：人 iPS細胞基因編輯和單細胞克隆系統

產品貨號：CellArtis Y30021

產品品牌：TAKARA/ CellArtis

英文名(ming)稱(cheng)：Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit

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