華雅思創快報：過去關于造血發(fa)生的研究主(zhu)要(yao)集中(zhong)在(zai)信號和轉錄因子，然而近期的研究熱點主(zhu)要(yao)是包括microRNAs的表觀遺傳調控。

研究人員發現在斑(ban)馬魚(yu)和小鼠(shu)中(zhong)，miR-142-3p在造血干細胞（HSCs）中(zhong)特(te)異性(xing)表(biao)達。敲除斑(ban)馬魚(yu)的(de)miR-142a-3p基因導(dao)致主(zhu)動(dong)脈-性(xing)腺(xian)-中(zhong)腎（AGM）區的(de)HSCs數量降(jiang)低，同時(shi)胸腺(xian)中(zhong)的(de)T細胞數量也降(jiang)低。從機(ji)制上來(lai)講，miR-142a-3p通過抑制干擾素調(diao)節因子7（irf7）介導(dao)的(de)炎癥信號通路來(lai)調(diao)節HSCs的(de)形成和分(fen)化。

此外，研究者還證實miR-142-3p在(zai)(zai)小鼠的(de)AGM區HSCs的(de)形成中(zhong)(zhong)也發(fa)揮了重(zhong)要的(de)作用(yong)，這也暗示了它在(zai)(zai)脊椎(zhui)動物(wu)中(zhong)(zhong)扮演著一個(ge)高(gao)度保(bao)守的(de)角(jiao)色。該研究還揭示了miR-142a-3p通過(guo)抑制(zhi)irf7信號通路在(zai)(zai)HSCs的(de)形成和發(fa)生(sheng)過(guo)程中(zhong)(zhong)起關鍵作用(yong)。本研究中(zhong)(zhong)Agilent Zebrafish Oligo Microarrays服務由(you)上(shang)海伯(bo)豪提供。

本(ben)研究是由*動物研究所生(sheng)(sheng)物膜(mo)與(yu)膜(mo)生(sheng)(sheng)物工程國家重點實(shi)驗室(shi)與(yu)北京307醫(yi)院青(qing)藤轉化醫(yi)學中心(xin)腫(zhong)瘤學實(shi)驗室(shi)共同合作(zuo)完(wan)成，文章的(de)(de)通訊(xun)作(zuo)者是中科院動物所的(de)(de)劉峰研究院。研究(jiu)(jiu)人員(yuan)首先以斑馬魚為研究(jiu)(jiu)對象(xiang)，進(jin)(jin)行(xing)一系列功能學實驗，發現(xian)(xian)(xian)miR-142a-3p在造血(xue)細胞中(zhong)(zhong)特異(yi)性表(biao)達(da)，推(tui)(tui)測它可能在造血(xue)中(zhong)(zhong)起了重要的(de)(de)作(zuo)用(yong)。為進(jin)(jin)一步(bu)的(de)(de)證(zheng)實以上(shang)推(tui)(tui)論，研究(jiu)(jiu)者通過(guo)敲(qiao)除miR-142a-3p基(ji)因，進(jin)(jin)行(xing)了一系列loss of function的(de)(de)實驗，實驗數據表(biao)明miR-142a-3p是HSC形成和T細胞分化過(guo)程中(zhong)(zhong)*的(de)(de)因子。進(jin)(jin)一步(bu)研究(jiu)(jiu)發現(xian)(xian)(xian)，敲(qiao)除miR-142a-3p基(ji)因影響了造血(xue)內皮(pi)細胞，進(jin)(jin)而延(yan)緩了zui早的(de)(de)HSCs細胞在胚胎中(zhong)(zhong)出現(xian)(xian)(xian)的(de)(de)時間。

為進一(yi)步的(de)(de)深(shen)入研(yan)究(jiu)(jiu)miR-142a-3p對(dui)HSC的(de)(de)形成和分化的(de)(de)生物學影響，研(yan)究(jiu)(jiu)者比較了對(dui)照組(zu)和miR-142a-3p基(ji)(ji)(ji)因(yin)敲除組(zu)的(de)(de)胚胎，分別(bie)提取受精后(hou)(hou)2天（2dpf）和受精后(hou)(hou)4天（4dpf）的(de)(de)對(dui)照組(zu)、突變組(zu)AGM區的(de)(de)RNAs，表達(da)譜芯片(pian)檢測后(hou)(hou)，發現有70個(ge)基(ji)(ji)(ji)因(yin)在(zai)2dpf和4dpf的(de)(de)胚胎中(zhong)上調（Figure 4B），采用(yong)Pictar和TargetScan預測miR-142a-3p的(de)(de)靶基(ji)(ji)(ji)因(yin)，獲得4個(ge)候選基(ji)(ji)(ji)因(yin)，進一(yi)步研(yan)究(jiu)(jiu)發現其(qi)中(zhong)irf7可能是miR-142a-3p在(zai)HSCs中(zhong)作用(yong)的(de)(de)zui主要(yao)的(de)(de)靶基(ji)(ji)(ji)因(yin)。后(hou)(hou)期(qi)，研(yan)究(jiu)(jiu)者通過qPCR、Western blotting等一(yi)系列實驗證實irf7是miR-142a-3p的(de)(de)直接靶基(ji)(ji)(ji)因(yin)，并(bing)非間接的(de)(de)。

那么irf7下游(you)又調控(kong)什么呢？為(wei)了使整個故事更加(jia)完(wan)整，研究(jiu)者試圖(tu)探究(jiu)更多，zui終發現(xian)irf7與Gcsfr-Nitric Oxide （NO）炎癥信號通路(lu)可(ke)能相關。華(hua)雅思(si)創快報認(ren)為miR-142a-3p在小鼠造血中也發揮了重(zhong)要的作用。

原(yuan)文圖解(jie)：

Figure 4 irf7 is a direct target of miR-142a-3p. （A） Heat map analysis of gene expression in controls and miR-142a-3p morphants at 2 dpf and 4 dpf. （B） Fold changes of upregulated or downregulated genes at 2 dpf and 4 dpf in miR-142a-3p morphants compared to controls. （C） An imperfect match of irf7 3′ UTR with miR-142a-3p as determined by a calculation using RNAHybrid. （D）Scheme of the PGL3 constructs containing irf7 WT and mutated 3′UTR. （E） Luciferase reporter activity of the reporter containing WT or mutated irf7 3′UTR when co-transfected with the miR-142a-3p duplex into HEK293T cells （mean ± SD, t-test, *P < 0.05, n= 3）. （F） Western blotting images showing that irf7 protein level was decreased in duplex-injected embryos at 4 dpf, compared to controls （left panel）. Quantitative analysis of the western blotting results is shown in right panel.